黄鼠狼喜欢晚上岀来觅食，喜欢走无水的小沟渠，顺着小沟渠边上觅食，黄鼠狼喜欢走老路，遇洞必进，遇弯必停，是洞是它躲避敌人用的，还有小青蛙，蟋蟀这些黄鼠狼的食物喜欢躲在洞里。
夜行性，尤其是清晨和黄昏活动频繁，有时也在白天活动。相机捕获和直接观察表明该物种主要是昼夜活动，尽管它已被相机捕获并发现在夜间更加活跃。通常单独行动。善于奔走，能贴伏地面前进、钻越缝隙和洞穴，也能游泳、攀树和墙壁等。除繁殖期外，一般没有固定的巢穴。通常隐藏在柴草堆下、乱石堆、墙洞等处。嗅觉十分灵敏，但视觉较差。性情凶猛，常捕杀超过其食量的猎物。
黄鼠狼冬季常追随鼠类迁移而潜入村落附近，在石穴和树洞中筑窝。它们擅长攀援登高和下水游泳，也能高蹦低窜，在干沟的乱石堆里闪电般的追袭猎食对象。黄鼬的警觉性很高，时刻保持着高度戒备状态，要想对黄鼬出其不意的偷袭是很困难的。
一旦遭到狗或人的追击，在没有退路和无法逃脱时，黄鼬就会凶猛地对进犯者发起殊死的反攻，显得无畏而又十分凶猛。黄鼬及其家族的其他成员还有一种退敌的武器，那就是位于肛门两旁的一对黄豆形的臭腺，它们在奔逃的同时，能从臭腺中迸射出一股臭不可忍的分泌物。假如追敌被这种分泌物射中头部的话，就会引起中毒，轻者感到头晕目眩，恶心呕吐，严重的还会倒地昏迷不醒。